分光光度計的基本工作原理是基于物質(zhì)對光（對光的波長）的吸收具有選擇性，不同的物質(zhì)都有各自的吸收光帶，所以，當光色散后的光譜通過某一溶液時，其中某些波長的光線就會被溶液吸收。在一定的波長下，溶液中物質(zhì)的濃度與光能量減弱的程度有一定的比例關(guān)系，即符合比爾定律。
分光光度計種類繁多，但不外乎簡易型、中檔型和型三大類。我們在選用分光光度計時需要考慮以下幾個方面：
1.波長檢測范圍，波長選擇方式：越的儀器波長檢測范圍越寬，當然價格也較高，用戶需要根據(jù)自己的需求選擇合適的波長范圍；對于簡單型的儀器，波長選擇方式一般是手動查找，這種方式的重復性較差，型的儀器中波長可以按照設(shè)定模式自動查找或掃描，其次型的波長掃描速度的檔位也會增加。
2.光束：光束類型分為單光束型，雙光束型或準雙光束型。單光束一般適于在給定波長處測量吸光度，不能作全波段光譜掃描，并且要求光源和檢測器具有很高的穩(wěn)定性；雙光束可以自動記錄，快速全波段掃描。可消除光源不穩(wěn)定、檢測器靈敏度變化等因素的影響，特別適合于結(jié)構(gòu)分析；假雙光束也就是比例雙光束，優(yōu)點是可以監(jiān)測光源變化帶來的誤差，它的原理是由同一單色器發(fā)出的光被分成兩束，一束直接到達檢測器，另一束通過樣品后到達另一個檢測器。但是這種方式并不能消除參比造成的影響。
3.光源:可見光區(qū)主要用鎢燈，鹵鎢(320～2500nm)；紫外區(qū)主要用氫燈，氘燈(180～375nm)；氙燈在紫外和可見光區(qū)均可用作光源。
4.樣品支架：簡單的樣品支架為推拉式四聯(lián)池架，一次只能測量一個樣品，參比和樣品分兩次測量；型的樣品池支架為兩個固定式，分別是樣品通道和參比通道，可以同時測量參比和樣品的吸光值。
5.狹縫：簡易型的狹縫一般是固定寬度模式，狹縫寬度多數(shù)為2nm,也有1.5nm的；型的儀器狹縫均為連續(xù)可調(diào)型，可以適應(yīng)高分辨率的需要。
6.光學性能指標：光學性能的高低直接影響到測量的準確性，其中光柵的技術(shù)指標尤為重要。型儀器的光柵質(zhì)量較好，一般*的光柵為凹面型，并且大尺寸的凹面光柵對應(yīng)的刻槽數(shù)越多，因此在分辨率和雜散光方面指標要優(yōu)于簡易型儀器。
7.檢測器：檢測器是利用光電效應(yīng)，將透過溶液的光信號轉(zhuǎn)換為電信號，并將電信號放大的裝置。簡易型儀器一般采用光敏二極管；中檔型儀器采用硅光二極管；型儀器的檢測器使用高靈敏度的光電倍增管和紅外檢測器。
8.顯示器：簡易型儀器多為機械表頭或數(shù)碼管顯示器，沒有數(shù)據(jù)處理器；型儀器的顯示器為液晶式或連接電腦，數(shù)據(jù)處理可由儀器自身具有的或外接計算機處理。
9.測量模式：簡易型儀器多為定點(固定波長)吸光度或透過率測量方式，基本不能進行波長掃描測量；型儀器的測量模式較多，可以顯示透過率、吸光度、濃度直接讀數(shù)、單光束，單點及掃描均可。
10.測量附件：衡量儀器質(zhì)量高低的重要方面是看儀器是否具有豐富的附屬測量器件，如偏振附件、積分球附件、反射附件、自動進樣器附件、色度分析軟件、薄膜附件。
11.測量樣品的狀態(tài)：可見和紫外的分光光度計一般測量液態(tài)樣品，紅外分光光度計一般能分析各種狀態(tài)(氣、液、固)的試樣。
分光光度計是通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度，對該物質(zhì)進行定性和定量分析。
